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基因克隆技术

发布者:亚博网页版    发布时间:2021-07-07     
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基因克隆技术是分子生物学的核心技术,分子克隆指的是在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其他载体分子,构成遗传物质的新组合,使之进入宿主细胞内并获得持续稳定增殖能力和表达。基因克隆技术的发展经历3个阶段:

第一阶段为经典的T4 DNA连接酶介导的TA克隆及粘性末端克隆;

第二阶段为基于DNA修饰酶的LIC系列克隆;

第三阶段为基于DNA重组酶的Gateway克隆及一步法克隆。


1、即用型表达克隆,构建表达载体所用的酶以及中间载体

提供140,000个预制即用型Nextday-ORF 克隆。无需再等上数日/数周即可马上进行基因表达或蛋白表达实验。每一个Nextday-ORF?克隆均经过序列验证,次日寄送,且多种病毒、非病毒类载体可选。


详情查看:1、一步到位or从头开始,GeneCopoeia基因克隆满足你所有想象


2、转染试剂

细胞转染是指将外源基因如DNA,RNA等导入细胞内的一种技术。根据哺乳动物细胞蛋白表达流程,细胞培养完成后需进行细胞转染,根据不同的实验目的可选择不同的转染方法。目前,常用的细胞转染方法主要分为三类途径:物理介导(电穿孔法,基因枪法、显微注射法)、化学介导(脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物介导法)、生物介导(病毒介导转染、原生质体转染)。


详情查看:1、GeneCopoeia转染试剂,攻坚克难:快、准、狠


3、构建表达载体

Gateway克隆技术作为一种可以快速、高效将DNA序列转移到载体上的克隆方法,Gateway技术依赖于下面描述的两个反应:BP反应和LR反应,通过BP反应获得入门克隆(有时候我们也说中间克隆),再通过LR反应将目的DNA以正确的方向连接到各种目的载体上,形成不同的表达载体。向大家介绍BP反应-构建入门载体和LR反应-构建表达载体:


详情查看:1、Gateway克隆技术高深莫测?


4、荧光素酶

荧光素酶(luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达,是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。

其中要介绍有:1、萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase);2、海肾荧光素酶(Renilla luciferase);3、Gaussia 分泌型荧光素酶;4、分泌型碱性磷酸酶(secreted alkaline phos-phatase,SEAP)


详情查看:1、神奇的荧光素酶(一),知否知否
详情查看:2、神奇的分泌型荧光素酶(二),知否知否


产品推介: 

1、构建表达载体所用的酶以及中间载体


货号载体名称规格描述
RCBM-1001-020EZRecombinase LR Mix20次反应催化attL x attR重组反应,高效率酶,与Gateway 克隆技术完全兼容
RCBM-1001-100100 次反应
RCBM-1002-020EZRecombinase BP Mix20次反应催化attB x attP重组反应,高效率酶,与Gateway?克隆技术完全兼容
RCBM-1002-100100 次反应
货号载体名称规格类型
EZ001pEZ-Lv19910ug慢病毒表达载体
EZ003pEZ-Lv23310ug
EZ004pEZ-Lv19510ug
EZ006pEZ-Lv20110ug
EZ007pEZ-M0210ug哺乳动物细胞表达载体
EZ008pEZ-M1310ug
EZ009pEZ-M6710ug
EZ010pEZ-M6810ug
EZ011pEZ-M9810ug
EZ012pEZ-SH0110ugHuman Safe Harbor载体
EZ013pEZ-SH0210ugMouse Safe Harbor载体
EZ014pEZ-B0110ug大肠杆菌表达载体
EZ015pEZ-B0210ug
EZ016pEZ-Lv23510ug慢病毒表达载体
EZ017pEZ-Lv23610ug
EZ018pEZ-Lv23710ug
EZ019pEZ-Lv23810ug
EZ021pEZ-P00210ug植物表达载体
EZ023pEZ-P00410ug
EZ026pEZ-P00710ug
EZ027pEZ-P00810ug
EZ029pEZ-P01010ug
EZ030pEZ-P01110ug
EZ031pEZ-P01210ug
EZ032pEZ-P01310ug
EZ033pEZ-M0610ug哺乳动物细胞表达载体
EZ034pEZ-M0910ug
EZ035pEZ-M1210ug
EG001pShuttle-D0110ug穿梭载体
EG002pShuttle-D0210ug

2、转染试剂

货号

名称

适用性

EF003

EndoFectin? Max转染试剂 (1 mL)

广泛适用于多种细胞

EF004

EndoFectin? Max转染试剂 (3 mL)

EF015

CRISPR-Fectin? 转染试剂 (1 mL)

优化的CRISPR-Cas9核蛋白专用的转染试剂。可与GeneHero? Cas9蛋白配合使用

EF015

EF016

EF007

EndoFectin? Expi293 转染试剂 (1 mL)

专注转染悬浮细胞293F,转染效率极高

EF009

EndoFectin? Expi293 增强转染试剂盒 (1L 转染用量)

EF010

EndoFectin? Expi293 增强转染试剂盒 (10L 转染用量)

EF005

EndoFectin? HepG2 转染试剂 (1 mL)

为常用细胞系HepG2进行优化设计

EF006

EndoFectin? HepG2 转染试剂 (3 mL)

EF001

EndoFectin? Lenti转染试剂 (1 ml)

转染293T细胞,可收获更高滴度的慢病毒

EF002

EndoFectin? Lenti转染试剂 (3 ml))


 3、BP反应-构建入门载体和LR反应-构建表达载体


货号名称说明
RCBM-1002-020EZRecombinase? BP Cloning Kit (20 rxn)Catalyzes attB x attP cloning(催化BP反应)
RCBM-1002-100EZRecombinase? BP Cloning Kit (100 rxn)Catalyzes attB x attP cloning(催化BP反应)
RCBM-1001-020EZRecombinase? LR Cloning Kit (20 rxn)Catalyzes attL x attR cloning(催化LR反应)
RCBM-1001-100EZRecombinase? LR Cloning Kit (100 rxn)Catalyzes attL x attR cloning(催化LR反应)


4、荧光素酶

 

货号产品名称产品特性荧光素酶规格
LF001Luc-Pair? Duo-Luciferase Assay Kit 2.0 Hot !稳定型萤火虫(Fluc)
海肾(Rluc)
100rxns
LF002300rxns
LF0031000rxns
LF004Luc-Pair? Duo-Luciferase HS Assay Kit Hot !高灵敏型萤火虫(Fluc)
海肾(Rluc)
100rxns
LF005300rxns
LF0061000rxns
LF007Luc-Pair? Firefly Luciferase HS Assay Kits高灵敏型萤火虫(Fluc)100rxns
LF008300rxns
LF0091000rxns
LF010Luc-Pair? Renilla Luciferase HS Assay Kit高灵敏型海肾(Rluc)100rxns
LF011300rxns
LF0121000rxns
LF013Luc-Pair? Duo-Luciferase HT Assay Kit稳定型, 无需预先裂解细胞,适用高通量分析萤火虫(Fluc)
海肾(Rluc)
10mL
LF01430mL
LF015100mL
LF016Luc-Pair ? Firefly Luciferase HT Assay Kit稳定型, 无需预先裂解细胞,适用高通量分析萤火虫(Fluc)10mL
LF01730mL
LF018100mL
LF019Luc-Pair? Renilla Luciferase HT Assay Kit稳定型, 无需预先裂解细胞,适用高通量分析海肾(Rluc)10mL
LF02030mL
LF021100mL

荧光素酶报告基因载体:

货号产品启动子报告基因示踪基因筛选标记抗性研究
ZX001pEZX-FR01(10?g)N/A*Firefly
(hLuc)
Renilla
(Rluc)
PuromycinKanamycin常规启动子等研究
ZX002pEZX-FR02(10?g)SV40Firefly
(hLuc)
Renilla
(Rluc)
N/A*AmpicillinUTR靶标等研究
ZX003pEZX-FR03(10?g)miniCMVFirefly(
hLuc)
Renilla
(RLuc)
PuromycinKanamycin转录因子结合位点等研究
货号名称规格产品特性
LF031Secrete-PairTM Dual Luminescence Assay Kit100rxns无需破碎细胞,吸取上清;检测Gluc 和SEAP酶活性
LF032300rxns

 

分泌型单荧光素酶检测试剂盒

货号名称规格产品特性
LF061Secrete-PairTM Gaussia Luciferase Assay Kit100rxns无需破碎细胞,吸取上清;检测Gluc的酶活性
LF0621000rxns

 

荧光素酶报告基因载体:

货号产品描述规格
ZX101pEZX-GN01pEZX-GN01 包含Gluc和SEAP的报告载体10?g
ZX102pEZX-GN03pEZX-GN03 包含Gluc和SEAP的报告载体10?g
ZX103pEZX-GA01pEZX-GA01 包含Gluc和SEAP的报告载体10?g
ZX104pEZX-GA02pEZX-GA02 包含Gluc和SEAP的报告载体10?g
ZX105pEZX-GA03pEZX-GA03 包含Gluc和SEAP的报告载体10?g
ZX106pEZX-LvGN01pEZX-LvGN01 包含Gluc和SEAP的报告载体 (lentiviral)10?g
ZX107pEZX-LvGA01pEZX-LvGA01 包含Gluc和SEAP的报告载体 (lentiviral)10?g


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